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细胞分离液快速操作说明

细胞分离液快速操作说明和使用及保存中的注意事项:

注意:1,分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果最*。

2,使用无静电反应的离心管,推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。

3,所有操作过程一定要在无菌条件下进行。

4,最*抗凝剂选择:EDTA、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂

体积。

A. 小量分离-使用1-2ml新鲜抗凝血,骨髓,脐带血:

1,取新鲜抗凝血1-2ml,与全血及组织匀浆稀释液(Cat#:2010C1119)1:1 混匀;

2,小心加于与混合液等体积的细胞分离液之液面上;

3,以400g(约1500 转/分)离心15 分钟(半径15cm 水平转子);

此时离心管中由上至下细胞分为四层。第一层;为血浆层。第二层;为环状乳白色淋巴细胞层。第三层;为透明分离液层。第四层;为红细胞层。收集第二层细胞放入含4-5ml 细胞洗涤液(Cat#:2010X1118)的试管中,充分混匀后,以1800 转/分离心20 分钟,弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2 次即得所需细胞。

B. 中量分离-使用5-10ml新鲜抗凝血,骨髓,脐带血:

1,取新鲜抗凝血5-10ml,与全血及组织匀浆稀释液(Cat#:2010C1119)1:1 混匀;

2,将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上;(混合液:分离液=2:1)

3,以500g(约1800 转/分)离心15 分钟(半径15cm 水平转子);

此时离心管中由上至下细胞分为四层。第一层;为血浆层。第二层;为环状乳白色淋巴细胞层。第三层;为透明分离液层。第四层;为红细胞层。收集第二层细胞放入含10ml 细胞洗涤液(Cat#:2010X1118)的试管中,充分混匀后,以1800 转/分离心20 分钟,弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2 次即得所需细胞。

C. 大量分离I-使用20ml新鲜抗凝血,骨髓,脐带血

1, 取新鲜抗凝血20ml 以200g(约1100 转/分)离心20 分钟弃去血浆;

2,向弃去血浆的血细胞中加入全血及组织匀浆稀释液(Cat#:2010C1119)12ml 小心混匀;

3,将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上;(混合液:分离液=2:1)

4,以600g(约2000 转/分)离心15 分钟(半径15cm 水平转子);此时离心管中由上至下细胞分为四层。第一层;为血浆层。第二层;为环状乳白色淋巴细胞

层。第三层;为透明分离液层。第四层;为红细胞层。收集第二层细胞放入含20ml 细胞洗涤液(Cat#:2010X1118)的试管中,充分混匀后,以1800 转/分离心20 分钟,弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2次即得所需细胞。

D. 大量分离II-使用50ml新鲜抗凝血,骨髓,脐带血:

1, 取新鲜抗凝血50ml 与HES-TBD550 液1:1 混合后再与1 份注射用生理盐水混匀20±2℃静置30 分钟。吸取混浊的上清液备用,弃去底部红细胞。

2,将步骤1 中留取的上清液以200g(约1100 转/分)离心20 分钟弃去上清保留沉淀细胞;

3,向沉淀的细胞中加入全血及组织匀浆稀释液(Cat#:2010C1119)20ml 小心混匀;

4,将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上;(混合液:分离液=2:1)

5,以600g(约2000 转/分)离心15 分钟(半径15cm 水平转子);

    此时离心管中由上至下细胞分为四层。第一层;为血浆层。第二层;为环状乳白色淋巴细胞层。第三层;为透明分离液层。第四层;为红细胞层。收集第二层细胞放入含20ml 细胞洗涤液(Cat#:2010X1118)的试管中,充分混匀后,以1800 转/分离心20 分钟,弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2 次即得所需细胞。

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