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人CYCLIN B1抗体酶联免疫分析说明

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围:                                                          96T

18pg/ml -700pg/ml

 

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中CYCLIN B1抗体含量

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本CYCLIN B1抗体水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入CYCLIN B1抗体,再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CYCLIN B1抗体呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人CYCLIN B1抗体浓度。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1瓶

7

终止液

6ml×1瓶

2

酶标试剂

6ml×1瓶

8

标准品(1200pg/ml)

0.5ml×1瓶

3

标包被

12孔×8条

9

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

4

样品稀释液

6ml×1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2张  

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1个

标本要求 

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

600pg/ml

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

300pg/ml

4号标准品

150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

150pg/ml

3号标准品

150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

75pg/ml

2号标准品

150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

37.5pg/ml

1号标准品

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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