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ELISA试剂盒如何做好优化

    ELISA试剂盒质量保证是一个复杂的过程,许多重要的环节都会影响检测质量。每一行业产品都有好有坏,由于生产厂家繁多,让消费者在选择这一块有了很大的困扰。

ELISA试剂盒加样的优化:
   在这一过程中,一般情况下有三次加样,它们分别是加标本,加酶结合物,加底物。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下倒置混和,不要在混匀器上强烈振荡。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清天然凝固、血*收缩后即可取得。也可在板孔中加入稀释液,再在其加入血清标本,然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。

ELISA试剂盒包被条件的优化:
1.包被液的选择:一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液,如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话,也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。
2.包被浓度的选择:包被的最适浓度随固相载体和包被物的性质变化,一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml,要明确针对特定包被抗原的最适包被浓度需要通过实验来确定。
3.包被温度的选择:通常是4-8度条件下放置一个晚上或者37度保温2小时,我们强烈建议4-8度条件下包被,有利于蛋白活性的保持。
4.包被抗原的选择:可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物,由于分子量太小,往往难于直接吸附在酶标板上,一般都先使其与无关蛋白质,比如BSA等偶联,偶联物吸附于固相载体上。

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