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瘦素elisa试剂盒正确的使用方法,新手的福音

   瘦素elisa试剂盒操作过程:
  1、加规范品:在酶标包被板上设规范品孔,依次参加不同浓度的规范品50ul(主张每个浓度做2个平行孔)
  2、加样:别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其他各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl,
  然后再加样品亲和素10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。
  3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  4、配液:将30倍浓缩洗刷液用蒸馏水30倍稀释后备用。
  5、洗刷:当心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  6、加酶:除空白孔外每孔参加酶标试剂50μl。
  7、温育:操作同3。
  8、洗刷:操作同5。
  9、显色:每孔先参加显色剂A50μl,再参加显色剂B50μl,悄悄震动混匀,37℃避光显色15分钟.
  10、停止:每孔加停止液50μl,停止反响(此时蓝色立转黄色)。
  11、测定:以空白空调零,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加停止液后15分钟以内进行。
  瘦素elisa试剂盒操作注意事项:
  1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
  2.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
  3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
  4.请每次测定的同时做标准曲线,有条件可以做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
  5.底物请避光保存。
  6.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
  8.本试剂不同批号组分不得混用。
  9.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
  10.ELISA检测的目的是为实验提供准确可靠的定量分析实验依据。为了保证实验数据的可靠性,在实验过程中必须坚持全面质量控制和全过程质量控制。在收集标本前都必须有一个完整的计划。
  11.正式实验时,应别离以阳性对照与阴性对照操控实验条件,待检样品应作一式二份,以确保实验成果的精确性。有时本底较高,阐明有非特异性反响,可选用羊血清、兔血清或BSA等关闭。
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