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新生牛血清的病毒检查方法

新生牛血清从出生14小时内未进食的新生牛采血分离血清,经除菌过滤后制成。牛血清生产过程中不得任意添加其他物质成分。

新生牛血清的病毒检查  

1. 细胞培养法  

  (1)非血吸附病毒检查  

  将新生牛血清供试品分别接种到人源(如人二倍体细胞)、猴源(如Vero细胞)以及牛肾传代细胞三种细胞,采用的牛肾传代细胞系应证明无牛病毒的污染。每种细胞至少接种6瓶,每瓶细胞悬液接种量不少于培养液总量的25%。于36±1℃培养21天。接种的每种细胞都应同时设立牛血清阴性对照和病毒阳性对照,阴性对照用牛血清应证明无牛病毒污染。

  培养过程中可根据细胞生长情况更换细胞培养液,每次更换培养液前应观察(肉眼/显微镜)有无细胞病变出现。培养到期后,阴性对照应无任何细胞病变出现,阳性对照应出现典型的细胞病变,试验成立。供试品检查应不出现任何细胞病变为阴性,符合要求。 

  (2)血吸附病毒检查  

  将上述接种供试品的每种细胞取2瓶进行血吸附病毒检查。用0.2%~0.5%鸡和豚鼠红细胞混合悬液覆盖于细胞表面,置2~8℃分钟,然后置20~25℃30分钟,分别进行镜检,观察红细胞吸附情况, 供试品检查结果均应为阴性。试验同时应设立血吸附阳性对照。 

  2. 免疫荧光抗体检查法  

  采用直接或间接免疫荧光抗体检查法,至少应对牛腹泻病毒,牛腺病毒、牛细小病毒、呼肠孤病毒、狂犬病病毒以及牛副流感病毒进行检查,结果均应为阴性。

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